測(cè)定意義:
活性氧(reactive oxygen species, ROS)是植物體內(nèi)的一把“雙刃劍”。ROS作為信號(hào)分子在植物生命活動(dòng)中發(fā)揮關(guān)鍵作用, 但ROS過(guò)量積累會(huì)造成氧化損傷,測(cè)定ROS含量對(duì)于評(píng)估植物細(xì)胞內(nèi)的氧化還原狀態(tài)至關(guān)重要。
ROS熒光探針是一類(lèi)無(wú)色、無(wú)熒光的染料分子,利用化學(xué)熒光指示劑即熒光探針:2-7-Dichlorofluorescin Diacetate,(DCFH-DA),在細(xì)胞內(nèi)與ROS發(fā)生反應(yīng)后生成具有強(qiáng)熒光的產(chǎn)物,通過(guò)檢測(cè)產(chǎn)物的熒光強(qiáng)度可在一定程度上反映組織內(nèi)的活性氧,這種熒光信號(hào)在激發(fā)波長(zhǎng)488nm和發(fā)射波長(zhǎng)525nm處有最大波峰,其熒光強(qiáng)度和活性氧水平成正比。
自備儀器和用品:
熒光酶標(biāo)儀、黑色96孔板、可調(diào)式移液器、低溫離心機(jī)、研缽/勻漿器、300目尼龍網(wǎng)、冰和蒸餾水。
注 意:
1、正式測(cè)定前務(wù)必取 3 - 5 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定;
2、為了您的安全和健康,請(qǐng)佩戴好防護(hù)用具;